免疫组化实验步骤 ：

1．包埋好的标本用切片机切石蜡切片3um

2．经60℃烘片1小时

3．二甲苯Ⅰ脱蜡10分钟

4．二甲苯Ⅱ脱蜡10分钟

5．梯度酒精复水 ：100%酒精5分钟 ，100%酒精5分钟 ，95%酒精5分钟 ，80%酒精5分钟 ，自来水冲洗 5分钟

6．进行抗原修复 ：将切片置于0.1mol/L且ph=6.0的枸橼酸液修复液中 ，沸水浴20分钟 ，停止加热后自然冷却20-30分钟

7. 用PBS 3分钟3次 ，组画笔画圈 ，滴加双氧水 ，孵育20min

8． 用PBS 3分钟3次 ，滴加封闭血清封闭1h

9．甩干  ，滴加适宜浓度的一抗置湿盒中4℃孵育过夜

10．用PBS 3分钟×5次洗去一抗

11．甩干 ，滴加二抗室温置孵育盒中孵育1小时（注意二抗种属 ，夏季30min ，冬季1h）

12．用PBS 3分钟×5次洗去二抗

13．甩干 ，滴加DAB 显色 ，水冲

14．苏木素染核5min (新配置的苏木素视情况而定)

15.流水冲洗多余的苏木素 ，分化液中分化1秒

16.流水冲洗5min

17.梯度酒精复水 ：80%酒精5分钟 ，95%酒精5分钟 ，100%酒精5分钟 ，100%酒精5分钟 ，二甲苯Ⅱ透明5min ，二甲苯Ⅰ透明5min（如为完全透明 ，可适当延长时间）

18.用中性树胶封片

19.镜检