细胞转染
细胞转染（Transfection）是指将DNA或者RNA导入真核细胞中的过程 。转染的目的是产生重组蛋白 ，或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达 。
根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短
，可以分为瞬转和稳转。
| 瞬转 |
稳转 |
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导入的DNA没有整合到基因组中 ，而是保留在细胞核上 |
导入的DNA整合到基因组中 |
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导入的遗传物质不传递到子代 ； 遗传改变只是暂时的 |
导入的遗传物质能够代代相传 ；遗传改变是永久的 |
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不需要选择性筛选 |
需要选择性筛选出稳定转染的细胞 |
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DNA载体和RNA都可用于瞬时转染 |
只有DNA载体可用于稳定转染 ；RNA本身不能稳定地导入细胞中 |
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导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平的蛋白质表达 。 |
单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA导致较低水平的蛋白质表达 。 |
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通常在转染后24-96小时内收获细胞。 |
需要2-3周的时间筛选出稳定转染的细胞克隆 。 |
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通常不适合使用具有诱导型启动子的载体的研究 。 |
适用于使用带有诱导型启动子的载体的研究 。 |
1 、材料
293T细胞 、MyoD表达质粒和EGFP表达质粒 、DMEM培养基 、链霉素/青霉素(双抗) 、FCS(小牛血清) 、PBS(磷酸盐缓冲溶液) 、胰酶/EDTA消化液 、转染试剂(TransFast)
2 、器材
20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头酒精灯 、废液缸 、血球计数板 、涡旋振荡器 、恒温水浴箱 、台式离心机 、35mm培养皿 、转染管 、15ml离心管 、观察用倒置显微镜荧光显微镜和CCD
3 、实验步骤
细胞传代
(1)试验准备 ：200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌) ，酒精棉球 ，废液缸 ，试管架 ，微量移液器 ，记号笔 ，培养皿 ，离心管 。
(2)弃掉培养皿中的培养基 ，用1ml的PBS溶液洗涤两次 。
(3)用Tip头加入1mlTrypsin液 ，消化1分钟(37 。C ，5%CO2) 。用手轻拍培养瓶壁 ，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止 。
(4)加入1ml的含血清培养基终止反应 。
(5)用Tip头多次吹吸 ，使细胞完全分散开 。
(6)将培养液装入离心管中 ，1000rpm离心5min 。
(7)用培养液重悬细胞 ，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿 。
(8)将合适体积完全培养液加入离心管中 ，混匀细胞后轻轻加入培养皿中 ，使其均匀分布 。
(9)将培养皿转入CO2培养箱中培养 ，第二天转染 。
